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组织细胞的破碎方法
点击次数:2453 发布时间:2009-03-22

    组织细胞的破碎方法很多,有机械方法、物理方法、化学方法和生物化学方法等。在破碎前,材料常需要预处理,如动物材料要除去与实验无关甚至有妨碍的结缔组织,脂肪组织和血污等,植物种子需要除壳,微生物材料需将菌体和发酵液成分分开等。

    不同实验规模、不同实验材料和实验要求,使用的破碎方法和条件也不同。一些坚韧组织,如肌肉、植物的根茎等,常需要强烈的搅拌或研磨作用,才能把其组织细胞破坏。而比较柔软的组织如肝、脑等,用普通的玻璃匀浆器即可达到完全破坏细胞的目的。对同一实验材料,由于实验目的(要求)的不同,采用的破碎方式也存在一定差异,如提取中的核酸和提取其中的核苷酸,前者必须保持十分温和的条件,以保持分子的完整性;后者可采用强烈手段。

  1. 机械法
  主要通过机械切力的作用使组织细胞破碎的方法,常用的器械有组织捣碎机、匀浆器、研钵和研磨、压榨器等。
  1)组织捣碎机 一般用于动物组织、植物肉质种子、柔嫩的叶芽等,转速可高达10000rpm/M以上。由于旋转刀片的机械切力很大,制备一些较大分子如核酸则很少使用。
  2)匀浆器 匀浆器的研钵磨球和玻璃管内壁之间间隙保持在十分之几毫米距离,破碎细胞的程度比组织捣碎机高。制作匀浆器的材料,除玻璃外,还可以用硬质塑料、不锈钢、人造荧光树脂等。
  3)研钵 多用于细菌或其他坚硬植物材料,研磨时常加入少量石英砂,玻璃粉或其他研磨剂,以提高研磨效果。
  4)细菌磨 是一种改良了的研磨器,比研钵具有更大的研磨面积,而且低部有出口。操作时先把细菌和研磨粉调成糊状,每次加入一小勺,研磨20-30秒即可将细菌细胞完全磨碎。

  2. 物理法
  主要通过各种物理因素使组织细胞破碎的方法。在生化制备中常用的方法有:
  1)反复冻溶法 先将样品深冷至-15---20度使之冻固,再缓慢的融化,反复多次,多用于动物性材料。
  2)急热骤冷法 将材料投入沸水中,维持85-90分钟,至水浴中急速冷却,此法可用于细菌及病毒材料。
  3)超声波处理 频率一般选在10KC至200KC,功率200-500瓦范围,处理时间有数分钟至数十分钟不等,处理过程中注意冷却。此法多用于微生物材料。

  3.化学及生物化学法
  有自溶法,酶解法和表面活性剂法等。
  1)自溶法 在一定PH和适当的温度下,利用组织细胞内自身的酶系统将细胞破碎的方法。此过程需较长时间,常用少量防腐剂如甲苯、氯仿等防止细胞的污染。
  2)酶溶法 利用各种水解酶,如溶菌酶、纤维素酶、蜗牛酶、半纤维素酶、脂酶等,将细胞壁分解,使细胞内含物释放出来。有些细菌对溶菌酶不敏感,加入少量巯基试剂或8摩尔尿素处理后,使之转为对溶菌酶敏感而溶解。
  3)表面活性剂处理 如十二烷基硫酸钠、氯化十二烷基吡啶等。



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