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链霉菌(放线菌)超声破碎条件
点击次数:1990 发布时间:2009-07-07

    放线菌属于原核生物系统进化树上的(G+C)摩尔百分含量(mol%)高的革兰氏阳性菌(Eubacteria)分枝类群,它虽然具有原核生物特有的分子生物学特性,但在其不同类群中,细胞壁的化学组分变化很大。在做大肠杆菌超声时,采用的是400W,破碎5s停5s的方法,效果不错,但是用在链霉菌上,由于细胞壁组成差异一般没什么效果。

    链霉菌(放线菌)超声破碎前处理一般是配置成一定浓度的菌悬液。使用超声破碎时采用的具体条件是:
    (1)取细菌的24 h培养液于5 000 r/min 下离心5 min收集菌体。

    (2)用pH 7.5的Na2HPO -NaH2PO 缓冲液洗涤3次,再用该缓冲液将菌体配成1:3的菌悬液。置于40 mL大塑料试管内。

    (3)将大塑料试管置于冰浴中,采用超声波破碎(功率200W,1/2”探头,破碎30s,间歇30s)。

    (4)破碎液于12 000 r/min下高速冷冻离心30 min,收集细胞碎片和上清夜。洗涤菌体也可以用预冷的生理盐水或pH8的Tris-HCl,洗涤一次就可以。另外,超声剂量随样品量、菌体改变比较大,功率可以到400-600w,破碎5s,停5s,冰浴,要加终浓度1 mM的PMSF。为确定合适的超声强度和次数,有必要随时镜检观察菌体是否完全破碎。



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